DIAFANIZAÇÃO COM KOH E COLORAÇÃO POR ALIZARINA S

DIAFANIZAÇÃO POR KOH E COLORAÇÃO DOS OSSOS POR ALIZARINA RED S

Os estudos dos vertebrados requerem preparações específicas no sentido de não danificá-lo ou desarticulá-lo.
A técnica de diafanização e coloração de ossos, em vertebrados, apresentam uma série de vantagens, entre elas, mantém o esqueleto integro e preserva a posição original do esqueleto, possibilitando o estudo das complexidades esqueléticas.

A técnica é dividida em fases:
1- Fixação em formol 10% por 48 horas
2- Evisceração
Obs: animais, retira-se a pele e eviscera-se se possível pela boca.
3- Desidratação em série alcoólica crescente (50%, 60%,70%,80%,90%,100%)
4- Maceração dos músculos por solução de KOH a 2%
Obs: a maceração só é interrompida quando é possível ver os ossos através dos tecidos diafanizados.
5- Coloração com Alizarina red S a 1% , este corante possui afinidade pelos íons de cálcio, e é devido a esta atração que só ocorre a coloração dos ossos, deixando as outras partes, como os músculos e cartilagens sem coloração.
6- Glicerinamento; as peças são passadas por misturas de água e glicerina gradualmente até a glicerina pura com timol a 1%.


Soluções e reagentes:
1-KOH 2%
KOH ............................................. 2 gramas
Água Destilada......................... 100 ml

2-Alizarina red S 1%
Alizarina red S ............................ 1 grama
Água Destilada ......................... 100 ml